Minyak Saposhnikovia Divaricata Murni kanggo Pembuatan Lilin lan Sabun Grosir Diffuser Minyak Esensial Anyar kanggo Reed Burner Diffusers
katrangan singkat:
2.1. Persiapan SDE
Rimpang SD dituku minangka jamu garing saka Hanherb Co. (Guri, Korea). Bahan tanduran kasebut dikonfirmasi sacara taksonomi dening Dr. Go-Ya Choi saka Korea Institute of Oriental Medicine (KIOM). Spesimen voucer (nomer 2014 SDE-6) disimpen ing Herbarium Sumber Herbal Standar Korea. Rimpang garing saka SD (320 g) diekstraksi kaping pindho kanthi etanol 70% (kanthi refluks 2 jam) lan ekstrak kasebut banjur dikonsentrasi ing tekanan sing sithik. Decoction disaring, lyophilized, lan disimpen ing 4 ° C. Hasil ekstrak kering dari bahan awal kasar 48,13% (b/b).
2.2. Analisis Kromatografi Cairan Kinerja Tinggi (HPLC) Kuantitatif
Analisis kromatografi ditindakake kanthi sistem HPLC (Waters Co., Milford, MA, USA) lan detektor susunan fotodioda. Kanggo analisis HPLC saka SDE,O-glucosylcimifugin standar dituku saka Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Korea), lansek-O-glukosilhamaudol lan 4′-O-β-D-glukosil-5-O-methylvisamminol diisolasi ing laboratorium kita lan diidentifikasi kanthi analisis spektral, utamane dening NMR lan MS.
Sampel SDE (0,1 mg) dibubarake ing etanol 70% (10 mL). Pemisahan kromatografi ditindakake kanthi kolom XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Fase gerak dumadi saka asetonitril (A) lan 0,1% asam asetat ing banyu (B) kanthi laju aliran 1,0 mL/menit. Program gradien multistep digunakake kaya ing ngisor iki: 5% A (0 menit), 5-20% A (0-10 menit), 20% A (10-23 menit), lan 20-65% A (23-40 menit). ). Dawane gelombang deteksi dipindai ing 210-400 nm lan direkam ing 254 nm. Volume injeksi yaiku 10.0μL. Solusi standar kanggo nemtokake telung kromo disiapake kanthi konsentrasi pungkasan 7,781 mg / mL (prim-O-glucosylcimifugin), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-glukosil-5-O-metilvisaminol), lan 31,125 mg/mL (sek-O-glucosylhamaudol) ing metanol lan disimpen ing 4 ° C.
2.3. Evaluasi Kegiatan Anti InflamasiIng Vitro
2.3.1. Kultur Sel lan Perawatan Sampel
Sel RAW 264.7 dijupuk saka Koleksi Budaya Tipe Amerika (ATCC, Manassas, VA, USA) lan ditanam ing medium DMEM sing ngemot 1% antibiotik lan 5.5% FBS. Sel diinkubasi ing atmosfer humidified 5% CO2 ing 37 ° C. Kanggo ngrangsang sel, medium diganti karo medium DMEM seger, lan lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) ing 1μg / mL ditambahake ing ngarsane utawa ora ana SDE (200 utawa 400μg/mL) kanggo tambahan 24 jam.
2.3.2. Penentuan Nitric Oxide (NO), Prostaglandin E2 (PGE2), Tumor Necrosis Factor-α(TNF-α), lan Produksi Interleukin-6 (IL-6).
Sel diobati karo SDE lan dirangsang nganggo LPS sajrone 24 jam. Produksi NO dianalisis kanthi ngukur nitrit nggunakake reagen Griess miturut panaliten sadurunge [12]. Sekresi sitokin inflamasi PGE2, TNF-α, lan IL-6 ditemtokake nggunakake kit ELISA (sistem R&D) miturut instruksi pabrik. Efek SDE ing produksi NO lan sitokin ditemtokake ing 540 nm utawa 450 nm nggunakake Wallac EnVision.™maca microplate (PerkinElmer).
2.4. Evaluasi Aktivitas AntiosteoarthritisIng Vivo
2.4.1. kewan
Tikus Sprague-Dawley jantan (7 minggu) dituku saka Samtako Inc. (Osan, Korea) lan dipanggoni ing kahanan sing dikontrol kanthi siklus cahya/peteng 12 jam ing°C lan% asor. Tikus diwenehi diet laboratorium lan banyuad libitum. Kabeh prosedur eksperimen ditindakake kanthi tundhuk karo pedoman National Institutes of Health (NIH) lan disetujoni dening Komite Perawatan lan Panggunaan Kewan ing universitas Daejeon (Daejeon, republik Korea).
2.4.2. Induksi OA karo MIA ing Tikus
Kéwan kasebut kanthi acak lan ditugasake menyang kelompok perawatan sadurunge wiwitan sinau (saben klompok). Solusi MIA (3 mg/50μL saka 0,9% saline) langsung disuntikake menyang ruang intra-artikular saka dhengkul tengen ing anestesi sing diinduksi karo campuran ketamin lan xylazine. Tikus dipérang dadi papat klompok kanthi acak: (1) klompok saline tanpa injeksi MIA, (2) klompok MIA kanthi injeksi MIA, (3) klompok sing diobati SDE (200 mg / kg) kanthi injeksi MIA, lan (4) ) kelompok sing diobati indometasin- (IM-) (2 mg/kg) kanthi injeksi MIA. Tikus diwenehake kanthi lisan karo SDE lan IM 1 minggu sadurunge injeksi MIA sajrone 4 minggu. Dosis SDE lan IM sing digunakake ing panliten iki adhedhasar sing digunakake ing panliten sadurunge [10,13,14].
2.4.3. Pangukuran Distribusi Bobot Hindpaw
Sawise induksi OA, imbangan asli ing kemampuan nahan bobot saka hindpaws diganggu. Tester incapacitance (instrumentasi Linton, Norfolk, UK) digunakake kanggo ngevaluasi owah-owahan ing toleransi bobot. Tikus dilebokake kanthi ati-ati ing kamar ukuran. Daya tahan bobot sing ditindakake dening anggota mburi rata-rata sajrone wektu 3 detik. Rasio distribusi bobot diitung kanthi persamaan ing ngisor iki: [bobot ing sikil mburi tengen/(bobot ing sikil mburi tengen + bobot ing sikil kiwa)] × 100 [15].
2.4.4. Pangukuran Tingkat Sitokin Serum
Sampel getih disentrifugasi ing 1,500 g suwene 10 menit ing 4 ° C; banjur serum diklumpukake lan disimpen ing -70 ° C nganti digunakake. Tingkat IL-1β, IL-6, TNF-α, lan PGE2 ing serum diukur nggunakake kit ELISA saka R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) miturut instruksi pabrik.
2.4.5. Analisis RT-PCR Kuantitatif Real-Time
Total RNA diekstraksi saka jaringan sendi lutut nggunakake TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), ditranskripsi mbalikke dadi cDNA lan PCR-amplified nggunakake TM One Step RT PCR kit karo SYBR green (Applied Biosystems). , Grand Island, NY, USA). PCR kuantitatif wektu nyata ditindakake nggunakake sistem PCR Terapan Biosystems 7500 Real-Time (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Urutan primer lan urutan probe ditampilake ing Tabel1. Aliquot cDNA sampel lan jumlah cDNA GAPDH sing padha digedhekake karo campuran master PCR Universal TaqMan® sing ngemot polimerase DNA miturut instruksi pabrik (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). Kondisi PCR yaiku 2 menit ing 50 ° C, 10 menit ing 94 ° C, 15 detik ing 95 ° C, lan 1 menit ing 60 ° C kanggo 40 siklus. Konsentrasi gen target ditemtokake nggunakake metode komparatif Ct (nomer siklus ambang ing titik silang antarane plot amplifikasi lan ambang), miturut instruksi pabrik.
Osteoarthritis (OA) minangka kelainan muskuloskeletal sing paling umum lan penyakit sendi degeneratif sing paling umum ing wong tuwa.1]. OA minangka kondisi sing disebabake dening ciloko, ilang struktur lan fungsi balung rawan, lan disregulasi jalur proinflamasi lan anti-inflamasi.2,3]. Utamane mengaruhi balung rawan artikular lan balung subchondral saka sendi sinovial lan nyebabake gagal sendi, sing nyebabake rasa nyeri nalika nandhang bobot kalebu mlaku lan ngadeg.4].
Ora ana obat kanggo OA, amarga angel banget kanggo mulihake balung rawan yen wis rusak [5]. Tujuan perawatan yaiku kanggo nyuda rasa nyeri, njaga utawa ningkatake mobilitas sendi, nambah kekuatan sendi, lan nyuda efek mateni penyakit kasebut. Pangobatan farmakologis OA ngarahake nyuda rasa nyeri supaya bisa nambah fungsi sendi lan kualitas urip pasien. Sanajan karusakan tulang rawan minangka acara utama ing OA, degradasi kolagen minangka kedadeyan dhasar sing nemtokake progresi OA sing ora bisa dibatalake kanthi inflamasi.6,7]. Pangobatan kanthi aktivitas anti-inflamasi lan chondroprotective samesthine bisa nyuda rasa nyeri lan njaga integritas matriks ing pasien OA.
Mulane, nyuda inflamasi bakal migunani kanggo manajemen OA. Pasinaon anyar nyaranake peran protèktif kanggo sumber daya herbal babagan perkembangan OA, ing babagan nyuda inflamasi kondrosit lan karusakan tulang rawan luwih lanjut, liwat kemampuan kanggo sesambungan karo jaringan sing gegandhengan karo sendi, sing nyebabake nyuda nyeri sendi [8].
Akar sakaSaposhnikovia divaricataSchischkin (Umbelliferae) wis akeh digunakake ing obat tradisional kanggo perawatan sirah, nyeri, inflamasi, lan atritis ing Korea lan China [9,10]. Efek farmakologis saka macem-macemSaposhnikovia divaricata(SD) uga kalebu anti-inflamasi, analgesik, antipiretik, lan antiarthritic.9,11]. Panaliten anyar nuduhake yen ekstrak kromo SD duweni efek arthritis antirheumatoid potensial ing model tikus arthritis sing diakibatake kolagen.10]; Nanging, sawetara pasinaon wis conducted kanggo ndhukung aktivitas anti-natoni lan antiarthritis sakaSaposhnikovia divaricataekstrak (SDE).
Mulane, panliten iki nyelidiki aktivitas anti-inflamasi lan antiosteoarthritis saka ekstrak etanol 70% SD. Kaping pisanan, efek anti-inflamasi SDE dievaluasiing vitroing LPS-mlebu RAW 264.7 sel. Sabanjure, efek antiosteoarthritis saka SDE diukur kanthi netepake distribusi bobot, degradasi tulang rawan artikular, lan respon inflamasi ing model tikus monosodium iodoacetate- (MIA-) sing diinduksi OA.